用 VIAFLO 电动移液器在 96 孔板做连续稀释：从误差来源到可复现 SOP

连续稀释为什么总做不平

在 96 孔板里铺浓度梯度，是细胞 assay、标准曲线、药物敏感性试验里最频繁的操作之一。手动做法通常是在每孔预先加好稀释液，从母液吸出一份加到第一孔，吹打混匀后取等量转到下一孔，依次类推。问题出在"依次"两个字上，每一步都是一次独立的吸排，枪头残留、混匀力度、停留时间都在变，误差沿着梯度一路累积。我们遇到过把 1:2 稀释做成 1:1.8、1:2.3 交替的离谱情况，标准曲线的 R² 直接掉到 0.95 以下。

预混法能压住哪些误差

把"转移"和"混匀"两件事拆开，是稳定梯度的关键。具体做法：每孔都先装等量稀释液（比如 100 µL），从母液取 100 µL 加入第一孔得到 1:2，吹打 3–10 次（可根据实际情况设定吹打次数）混匀后，再从第一孔取 100 µL 到第二孔。这样每步的转移体积恒定，混匀动作标准化，通道间差异也小。VIAFLO 多通道电动移液器在这里的好处，是把同一动作在 多个通道上同步复现，手动时左手快、右手慢带来的孔间差就被抹掉了。

移液量不能低于下限

多通道移液器的精度有硬性边界。ISO 8655:2022 对移液器的系统误差和随机误差都给出了允差，排枪还要单独看通道间不一致性（通道间 CV）。做 GLP、CNAS 这类体系的实验室，移液器的周期检定还要再对照国家计量检定规程 JJG 646-2006《移液器》，它和 ISO 8655 一起构成国际与国内的双重合规依据。经验上，单步转移体积最好不低于移液器标称量程的 10%，也不要低于 20 µL，体积越小，残留占比越高，梯度越容易走形。如果要做 1:3、1:4 这种大跨度，用 50 µL 母液加 150 µL 稀释液，比 25 µL 加 75 µL 稳得多。我们一般把最小转移体积锁在 50 µL 以上。

别忘了板和封膜

梯度铺好后，边缘孔（A 排和 H 排）蒸发更快，浓度会偏高，这是 96 孔板的边缘效应，和移液无关。铺完立即贴封板膜、离心去除气泡、尽量缩短板在室温的暴露时间，能把这部分波动压到可接受范围。板内验证也很简单：用一种已知吸光度的染料走一遍梯度，读 OD 值画曲线，线性好说明操作没问题。下面的示意图给出我们常用的布局。

不是所有梯度都要上VIAFLO电动移液器

真正适合 VIAFLO 多通道电动移液器的场景是一天要铺十几块板、梯度跨度大、或者要跨板复现同一套稀释，这时候电动的程序化移液能把批间差降到最低。如果延伸到快速的孔板buffer分液，那就不该再纠结移液器，直接看自动分液设备 Welljet 会更有帮助。

您可以在我们的 INTEGRA 产品目录 里比对 ASSIST PLUS 移液工作站 这类更高通量的方案。具体项目规划欢迎 联系我们的应用支持。